材料与方法

实验材料  （1）实验动物：雄性Sprague-Dawley大鼠20只，体重140~160g，由浙江大学医学院实验动物中心提供。（2）实验试剂： cAMP（Sigma公司），氯胺酮为市售临床用药。其他试剂均为国产分析纯级。（3）实验仪器： 高效液相HP1100（惠普公司），检测器为二极管阵列紫外检测器（DAD），HP微机，hypersil ODS色谱柱4.0×250mm（HP Inc, U S A）。

实验方法  大鼠随机分为对照组和氯胺酮组，每组10只。氯胺酮组：腹腔内注射氯胺酮麻醉剂量10mg/kg，对照组以等量的生理盐水。30 min后股动脉放血处死动物，收集血液，分离出外周血白细胞，超声破碎法制成酶样品。同时剪开胸腔，用生理盐水从下腔静脉灌洗，去除肺组织中残余血，剪取肺组织25mg，在电动玻璃匀浆器中制成匀浆，作为酶样品。两种酶样品均进行蛋白定量。

酶反应在含Mg2+、Ca2+的PBS液中进行，反应管中包含酶样品20μl、cAMP1μmol/L，反应液总量200μl，反应管置于37℃水浴反应30min，100℃水浴3min终止反应，12000 r/min 4℃离心30min，取上清液50μl进样，在高效液相色谱法(HPLC)中以外标法测量对照管和反应管中的底物含量，底物反应量（pmol）=对照管-反应管。磷酸二酯酶活性＝底物反应量／蛋白含量/反应时间，单位用pmol.mg-1.min-1表示。

标准曲线绘制  取cAMP标准品溶于含Mg2+、Ca2+的PBS液，配制成浓度为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0μmol/L，于相同条件下进行测定，以浓度（C）为横坐标，cAMP的峰面积（RA）为纵坐标, cAMP的标准曲线RA=1.200C-0.2851（r=0.9985）。

统计学分析  数据用x(——) ±ｓ表示，数据间比较采用两样本均数ｔ检验, P＜0.01为统计学有意义。

结   果

氯胺酮对大鼠外周血白细胞PDE活性的影响    氯胺酮可抑制大鼠外周血白细胞PDE水解cAMP的活性。氯胺酮组PDE活性为(181±52) pmol.mg-1.min-1，与对照组(273±61) pmol.mg-1.min-1相比，P＜0.01。

氯胺酮对大鼠肺组织PDE活性的影响     氯胺酮可抑制大鼠肺组织PDE水解cAMP的活性。氯胺酮组PDE活性为(212±75)pmol.mg-1.min-1，与对照组(359±98) pmol.mg-1.min-1相比，P＜0.01。

大鼠外周血白细胞及肺组织cAMP－PDE色谱图见图1。

参考文献

1      Sato T, Hirota K, Matsuki A, et al. Ketamine inhibits the tonic response to carbachol and histamine in the guinea pig trachea. Eur J Anaesthesiol, 1998 ,15: 486-492.

2      Cheng EY, Mazzeo AJ, Bosnjak ZJ, et al. Direct relaxant effects of intravenous anesthetics on airway smooth muscle. Anesth Analg，1996, 83: 162-168.

3      Mark A. Development status of second generation PDE4 inhibitors for asthma and COPD: the story so far. Monaldi Arch Chest Dis, 2002, 57: 48–64.

4      James J, Peter C, Julie N, et al. Anti-inflammatory effects of theophylline:modulation of cytokine production. Ann Allergy Asthma Immunol,  1996, 77:34–38.

5      Torphy TJ. Phosphodiesterase isozymes: Molecular targets for novel antiasthma agents. Am J Respir Crit Care Med，1998, 157: 351-370.

6      Essayan DM, Huang SK, Kagey-Sobotka A, et al. Differential efficacy of lymphocyte- and monocyte-selective pretreatment with a type 4 phosphodiesterase inhibitor on antigen-driven proliferation and cytokine gene expression.  J Allergy Clin Immunol，1997，99: 28-37.

7      Goncalves de Moraes VL, Singer M, Vargaftig BB, et al. Effects of rolipram on cyclic AMP levels in alveolar marcrophages and lipopolysaccharide-induced inflammation in mouse lung.  Br J Pharmacol, 1998, 123: 631-636.

8      Mahinaz H, Bpharm M, Alexandra T, et al. Current drug treatment of asthma. Hospital Pharmacist, 2001, 8:241-247.

9      Mark A. Phosphodiesterase 4 inhibitors and the treatment of asthma. Drugs, 2000, 59: 193-212.

10    Thomas J, Carver M, Haisch C, et al. Diffirential effects of intravenous anesthetic agents on cell-mediated immunity in the Rhesus monkey. Clin EXP Immunol, 1982, 47:457-466.